• 黄曲霉毒素B1检测免疫亲和柱
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【概要】
黄曲霉毒素(Aflatoxin)是黄曲霉、寄生曲霉等真菌产生的次级代谢产物,被世界卫生组织的癌症研究机构划分为1类致癌物,同时又是一种毒性极强的剧毒物质,广泛存在于各种食物中。玉米,花生,大米,小麦等谷物及其副产品是黄曲霉毒素的主要来源,同时饲料中的黄曲霉毒素B 1 经过动物代谢后产生的黄曲霉毒素M 1 仍然具有很强的毒性和致癌性,也广泛存在牛奶,血液,组织等食品中。黄曲霉毒素作为肝癌的三大诱因之一,也是诱发胃癌,肠癌等疾病的主要原因之一,对人类的健康构成很大威胁。世界各国对食品,饲料中的黄曲霉毒素都有严格的限量标准。
【适用范围及性能】
用于定性、定量检测谷物、副食品、酒类等食品和饲料等样本中的黄曲霉毒素总量 B 1 时的样品前处理。
柱容量:≥200ng
回收率:≥90%
【试验原理】
本产品的测定的基础是抗原抗体反应,黄曲霉毒素 B 1 单克隆抗体连接在柱内凝胶上,样品中的黄曲霉毒素 B 1 经过提
取、过滤、稀释,然后将样品提取液缓慢的通过黄曲霉毒素B1免疫亲和层析柱,在免疫亲和柱内,毒素与抗体结合,之后洗涤免疫亲和柱除去没有被结合的其他物质。用甲醇洗脱黄曲霉毒素 B 1 ,然后注入到分析仪器中用于检测。
【包装组成】
根据不同规格,每一个盒中包含 5-25 支黄曲霉毒素免疫亲和层析柱及 1 份说明书。
【需要而未提供的设备及试剂】
设备:
┅┅高速均质器或组织匀浆机
┅┅粉碎机
┅┅200ml/50ml 量筒
┅┅天平:感量 0.1g
┅┅微量移液器:单道 100ml~1000ml
┅┅槽纹滤纸(折叠快速定性或定量滤纸)
┅┅玻璃微纤维滤纸(1.5mm 孔径)
┅┅50ml 漏斗
┅┅一次性玻璃试管
┅┅泵流操作架(包括空气泵,不同容积的玻璃注射器等)
试剂:
┅┅甲醇(色谱级)
┅┅蒸馏水或去离子水
┅┅pH7.0 磷酸盐缓冲溶液(PBS):称取 8.0g 氯化钠,1.2g
磷酸氢二钠,0.2g 磷酸二氢钾,0.2g 氯化钾,用 990mL 纯
水溶解,然后用浓盐酸调节 pH 值至 7.0,最后用纯水稀释至
1000mL
┅┅吐温-20/PBS 溶液(0.1%):取 1mL 吐温-20,加入 PBS缓冲溶液并定容至 1000mL
【试剂配制】
样品提取液:根据不同的样品配置不同浓度的甲醇水溶液,作为样品提取液。
【样本处理步骤】
(一)花生,玉米,大米,小麦及其制品,植物油脂和饲料
┅┅取 25g 粉碎的样品(植物油脂直接取样,无需处理)与125mL 甲醇-水(7:3)溶液混合;
┅┅加入 5.0g 氯化钠以均质器高速搅拌,提取 2 分钟;
┅┅4000r/min 离心 5min 或用槽纹滤纸过滤;
┅┅取 15mL 滤液并加入 30mL 水稀释,用玻璃微纤维滤纸过滤,取稀释后液体待测;
┅┅将免疫亲和柱连接于 20.0mL 玻璃注射器下。准确移取15.0mL 样品提取液注入玻璃注射器;
┅┅将空气压力泵与玻璃注射器连接,调节压力使溶液以约6mL/min 流速缓慢通过免疫亲和柱,直至 2~3mL 空气通过柱体;
┅┅以 10.0mL 水淋洗柱子 2 次,弃去全部流出液,并使2mL~3mL 空气通过柱体;
┅┅准确加入 1.0mL 色谱级甲醇洗脱,流速为 1 mL/min~2mL/min,收集全部洗脱液于玻璃试管中,供检测用。
(二)酱油
┅┅取 50g 试样与 100mL 甲醇-水(8:2)溶液混合;
┅┅加入 2.5g 氯化钠以均质器高速搅拌,提取 1 分钟;
┅┅4000r/min 离心 5min 或用槽纹滤纸过滤;
┅┅取 10mL 滤液并加入 40mL 水稀释,用玻璃微纤维滤纸过滤
┅┅取稀释后液体待测;
┅┅将免疫亲和柱连接于 10.0mL 玻璃注射器下。准确移取10.0mL 样品提取液注入玻璃注射器;
┅┅将空气压力泵与玻璃注射器连接,调节压力使溶液以约6mL/min 流速缓慢通过免疫亲和柱,直至 2~3mL 空气通过柱体;
┅┅用 10.0mL 0.1%的吐温/PBS 清洗,再以 10.0mL 水淋洗柱子2次,弃去全部流出液,并使2mL~3mL空气通过柱体;
┅┅准确加入1.0mL 色谱级甲醇洗脱,流速为1 mL/min~2mL/min,收集全部洗脱液于玻璃试管中,供检测用。
(三)食醋
┅┅取5g 试样,加入1.0g 氯化钠;
┅┅以pH7.0 磷酸盐缓冲溶液稀释定容至 25.0mL;
┅┅4000r/min 离心 5min 或用槽纹滤纸过滤;
┅┅取10mL 滤液并加入10mL 水稀释,用玻璃微纤维滤纸过滤
┅┅取稀释后液体待测。
┅┅将免疫亲和柱连接于10.0mL 玻璃注射器下。准确移取10.0mL 样品提取液注入玻璃注射器;
┅┅将空气压力泵与玻璃注射器连接,调节压力使溶液以约6mL/min 流速缓慢通过免疫亲和柱,直至2~3mL 空气通过柱体;
┅┅用10.0mL 0.1%的吐温/PBS 清洗,再以10.0mL 水淋洗柱子2次,弃去全部流出液,并使2mL~3mL空气通过柱体;
┅┅准确加入1.0mL 色谱级甲醇洗脱,流速为1 mL/min~2mL/min,收集全部洗脱液于玻璃试管中,供检测用。
【结果判定】
经免疫亲和柱净化后,收集到的甲醇洗脱液可直接使用荧光计或者HPLC检测,也可使用薄层色谱或者酶联免疫试剂盒进行检测。收集到的1mL洗脱液中的黄曲霉毒素B1含量相当于1g样品中黄曲霉毒素B1 含量。
【高效液相参考谱图】
【注意事项】
┅┅黄曲霉毒素危害极大,应戴手套操作。
┅┅使用过的玻璃容器及黄曲霉毒素溶液最好用 5%浓度次氯
酸钠溶液浸泡过夜。
┅┅不要使用过了有效日期的免疫亲和柱。
【贮藏条件及保存期】
贮藏条件:亲和柱可于常温保存,2-8℃储存可延长有效期,
不可冻存
保存期:该产品有效期为12 个月。





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